冷冻过程中的降温是技术的难点,因为在0℃至-80℃的温度下,的形态和功能会遭到损害,甚至导致的。为了减少和避免降温过程对的损伤,必须让快速度过这一阶段,为此不仅要考虑降温的速率,还要考虑在结冰时产热的影响,所以用到倍玛特程序降温仪(冷冻仪)这一设备。终冷冻的将储存于-196℃的液氮罐中。 合肥倍玛特仪器设备有限公司欢迎您的咨询!
细胞冷冻保存,1. 材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
稳定阶段(从-110℃开始) 从比较大的安全性出发,拓纷程控速率冷冻仪在细管被取出之前,先将其冷却至-140℃。操作期间盖子管着的时候,拓纷程控速率冷冻仪里嵌入的微型开关确保设备能及时并自动地把温度降低到需要的水平。一个新型冷冻循环,运行速度快一旦细管被卸载取出,重新加热和烘干程序就会被气动。由于的工作效率和强大的加热组件(高达2500w),20分钟之内拓纷程控速率冷冻仪就会准备好开始一个新的制冷环节。