细胞冷冻保存,1. 材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
程序降温仪的产品特点分别是:前部开门,方便样品的放入和取出,仪器自带至少6种常见程序,覆盖用户大部分用途; 至少20个自设定程序,可根据不同应用需求自行设定;冷冻曲线可显示样品温度和腔体温度,融化潜热等参数,确保整个操作过程备有证明文件,直观可靠;温度偏差< 2℃(降温过程中腔体内两点间温差);内置风扇(带防护网)提供水平层流循环风,均匀分散注入的液氮,确保温度均一性。