多管发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖产酸产气的特征,检测水样中大肠菌群的方法。多管发酵的大肠菌群阳性,如果在44.5℃的培养基上进行24h的培养,能释放出荧光产物而使培养基在紫外光源的照射下呈现荧光反应,此种方法即可检测出样本中是否含有大肠,具体步骤:取一定量水样于乳糖蛋白胨培养液中进行初发酵实验(推测实验),再进行平板分离(证实实验)复负发酵实验鉴定(完成实验)。
根据各稀释度发酵的管数查可能数(mostprobablenumber,MPN)表,求得每10mL或每升水样中的大肠菌群数。该法方法简单,实验的要求和成本低,但是该方法易受其他因素的干扰而影响结果的准确性。
大肠的快速检测方法
1)分子生物学的快速检测方法:在分子的水平上通过研究生物大分子如核酸、蛋白质的结构来检测大肠。常见方法如下。
A:PCR检测技术聚合酶链式反应简称PCR (polymerasechainreaction),是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,扩增的一个周期由高温变性、低温退火、适温延伸等几步反应组成,反复循环,使目的DNA得以迅速扩增,2~4min即可完成一个循环,2~3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。大肠的检测可采用PCR技术。通过PCR扩增UidA能够检测大肠和志贺氏菌。
B:基因芯片技术:基因芯片(genechip)技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种快速的核酸序列分析手段。它将各种基因寡核苷酸点样于芯片表面,微生物样品DNA经PCR扩增后制备荧光标记探针,然后再与芯片上寡核苷酸点杂交,后通过检测杂交信号的强度及分布确定检测样品中特定微生物的存在与丰度。研发了检测大肠O157∶H7的芯片,并结合使用生物传感器,使得检测限降低到6×103CFU/mL。
相化及抗原或的酶标记。基本原理是把抗原或在预先结合到某种固相载体表面,结合在固相载体表面的抗原或者保持学活性,测定时,将受检样本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体上的抗原或起反应,反应终止时,固相载体上酶标抗原或被结合量(复合物)即与标本中待检或抗原的量呈一定比例,经洗涤去除反应液中其他物质,加入酶反应的底物后,底物即被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。由于酶的催化效率很高,间接地放大了反应的结果,使测定达到极高的灵敏度。